Ensayo de neutralización in vitro de aplicación en la evaluación de inmunógenos contra la hepatitis A, obtenidos mediante la tecnología de expresión en fagos filamentosos / In vitro neutralization assay to evaluate new hepatitis A vaccine candidates

La inmunidad contra el virus de la hepatitis A (VHA) se debe en primera instancia a la inducción de anticuerpos neutralizantes. Disponer de ensayos de neutralización es indispensable para evaluar nuevos candidatos vacunales contra este patógeno. En el presente trabajo se desarrolló un ensayo de neutralización in vitro que permitió evaluar la inmunogenicidad de mimotopos del VHA obtenidos mediante la tecnología de expresión en fagos al ser inmunizados ratones Balb/c. Diferentes diluciones de anticuerpos se incubaron con 10³ o 10² Dosis Infecciosas en Cultivo de Tejidos 50 por ciento (DICT50) del clon citopàtico HM175/18f de VHA, y se inocularon en placas con células FRhK4. Después de 7 días de incubación el título neutralizante se determinó como el recíproco de la dilución del suero capaz de reducir la multiplicación viral al 50 por ciento. Tanto 10³ como 10² DICT50 fueron neutralizadas por el anticuerpo monoclonal 7E7 y los sueros humanos (A12 y A31) positivos a anticuerpos anti-VHA. Los controles negativos del ensayo no neutralizaron al virus. Los títulos neutralizantes de los sueros de ratones inmunizados con fagos portadores de mimotopos de VHA oscilaron entre 4 y 16, mientras que los sueros preinmunes y los de ratones inmunizados con fago salvaje M13 no neutralizaron la infectividad viral. Este ensayo de neutralización resultó adecuado para la evaluación de los inmunógenos propuestos(AU)

Immunity to hepatitis A virus (HAV) is in first instance due to neutralizing antibodies. Neutralization assays are essential to evaluate new candidate vaccines against this pathogen. In this paper, an in vitro neutralization assay to evaluate HAV vaccine candidates using phage-display technology is described. 10³ and 10² DICT50 of HAV were incubated with different antibodies preparations and were inoculated onto plates with FRhK4 cells. After seven days of incubation, the neutralizing titer was determined as reciprocal of the serum dilution reducing HAV growth (inhibition of CPE) by 50 percent. 10³ and 10² DICT50 were neutralized by 7E7 anti-HAV monoclonal antibody and anti-VHA positive human sera (A12 and A31). Negative controls of the assay did not neutralize viral infectivity. Sera from mice immunized with phages displaying VHA mimotopes had neutralizing titers from 4-16. Neither negative control nor pre-immune and sera from mice immunized with M13 wild type phage neutralized HAV. A simple and faster in vitro neutralization assay was developed to evaluate new HAV vaccine candidates(AU)

Identification of hepatitis A virus mimotopes by phage display, antigenicity and immunogenicity.

A phage-displayed peptide approach was used to identify ligands mimicking antigenic determinants of hepatitis A virus (HAV) for the first time. Bacteriophages displaying HAV mimotopes were isolated from a phage-display peptide library by affinity selection on serum antibodies from hepatitis A patients. Selected phage-peptides were screened for reactivity with sera from HAV infected patients and healthy controls. Four cloned peptides with different sequences were identified as mimotopes of HAV; three of them showed similarity in their amino acid sequences with at least one of the VP3 and VP1 antigenic proteins of HAV. One clone was recognised by 92% of the positive sera. The phagotopes competed effectively with HAV for absorption of anti-HAV-specific antibodies in human sera, as determined by ELISA. The four phage clones induced neutralising anti-HAV antibodies in immunised mice. These results demonstrate the potential of this method to elucidate the disease related epitopes of HAV and to use these mimotopes in diagnostic applications or in the development of a mimotope-based hepatitis A vaccine without the necessity of manipulation of the virus.

Influenza: vacunas clásicas y novedosas a las puertas de otra pandemia / Influenza. Classic and novel vaccines on the verge of another pandemic

Los virus de la influenza A, además del hombre, infectan otros mamíferos y una gran variedad de especies de aves. Desde 1997 se sabe que cepas aviares son capaces de infectar al hombre provocando una enfermedad generalmente leve. El brote actual de gripe aviar H5N1 en humanos ha puesto en alerta a la comunidad científica internacional, no solo por su elevada mortalidad sino por su potencialidad en la generación de una nueva pandemia. Las autoridades sanitarias han puesto en marcha un amplio programa para la preparación ante esta contingencia, que abarca diferentes campos, desde el diagnóstico y la detección precoz de los brotes tanto en animales como en humanos, la caracterización sistemática de las cepas circulantes, el sacrificio de aves infectadas, la producción masiva de antivirales y por supuesto el desarrollo y producción a gran escala de vacunas eficaces. En este último tema se trabaja intensamente tanto en el mejoramiento de las vacunas ya existentes como en la búsqueda de alternativas basadas en tecnologías denueva generación(AU)

Relación de la tuberculina-reacción y la vacuna BCG en población escolar de Barquisimeto 1982-1983 / Relation of the tuberculin-reaction and BCG vacine in school children population of Barquisimeto

Se estudió una muestra de 1.094 escolares seleccionados por conveniencia, del Grupo Escolar "Cerritos Blancos" de Barquisimeto, Estado Lara (1982 - 1983), a los cuales se les aplicó la prueba tuberculínica, siendo un alto porcentaje (95,24 por ciento) negativos, a pesar de que la mayoría (84.82 por ciento) estaban vacunados con B.C.G. No se encontraron diferencias significativas entre los vacunados, el estado nutricional y la respuesta al P.P.D. De esto se concluye que la prueba tuberculínica no parece ser una medida muy eficaz para evaluar la alergia conferida con la vacunación B.C.G, cuando se realiza con dos unidades internacionales (0.1 cc.), que son las condiciones y metodología con las cuales se realizó este trabajo y para juzgarla debidamente hay que emplear reacciones tuberculínicas muy sensibles, y cuando la alergia cutánea disminuya de intensidad, el aumentar la dosis de tuberculina permite obtener reacciones positivas